Nhuộm papanicolaou

1. ĐẠI CƯƠNG

Kết hợp một phẩm nhuộm nhân bằng hematô xylin Harris và một phẩm nhuộm bào tương bởi Orange G và một phẩm nhuộm chủ yếu là Verte lumière, nâu Bismarck và Eosin (hỗn hợp đa sắc EA50 của Papanicolaou). Từ khá lâu, phương pháp này được chọn để nhuộm các tế bào ung thư.

2. CHỈ ĐỊNH

Tất cả các tiêu bản tế bào học

3. CÁC BƯỚC TIẾN HÀNH

- Tiêu bản nhúng liên tục trong cồn 900, 800, 500 rồi nước cất 2 lần x 30‘ mỗi bể.

- Nhuộm nhân trong hematô xylin Harris 3 - 6 phút.

- Rửa nước cất

- Nhúng 6 lần trong dung dịch acid HCL 0.25.

- Rửa nước chảy 6 phút (rồi tráng nước cất 30”).

- Chuyển liên tục trong cồn 500, 700, 800, 900 30” mỗi bể.

- Nhuộm trong dung dịch Orange G 90”.

- Nhúng trong 2 bể liên tiếp cồn 950 30” mỗi bể.

- Nhuộm trong dung dịch đa sắc EA50 của Papanicolaou 90”.

- Nhúng qua 3 bể cồn 950 30” mỗi bể.

- Chuyển vào cồn tuyệt đối.

- Chuyển vào hỗn hợp cồn/xylen tỷ lệ 1:1 rồi vào xylen và gắn Baume.

Kết quả:

- Nhân tế bào                                                     xanh xám hoặc tím.

- Bào tương của các tế bào ưa acid                   màu hồng đỏ hoặc vàng.

- Bào tương của các tế bào ưa bazơ                  xanh sáng đôi khi xanh ve sẫm.

Dùng bình chứa 2000 ml để hòa tan alum và nước cất bằng cách đun nóng. hòa tan hematô xylin và cồn vào một cốc nhỏ. Lắc mạnh để hematô xylin tan hết rồi trộn 2 dung dịch vào nhau. Đun sôi dung dịch nhanh nhất nếu có thể. Lấy dung dịch ra khỏi bếp và cho từng ít một ô xyt thu ngân vào. Tiếp tục đun lại dung dịch cho đến khi có màu tím thẫm. Lấy dung dịch ra khỏi bếp và làm lạnh đột ngột. Sau cùng cho acid acetic vào. Lọc trước khi dùng.

*Dung dịch Orang G :

Orange G                                             0,5 g 

Cồn 95                                                 100 ml 

Acid phosphotungstic                            0,015 g.

*Hỗn hợp EA50

Verte lumière jaunâtre                           0,375 g. 

Brun Bismarck                                      0,4 g 

Eosin jaunâtre                                       2,5 g 

Nước cất                                              50 ml 

Cồn 960                                               609 g

Methanol absolu                                    160 g

*Dung dịch acid phosphotungstic trong cồn etanol 50^o (1,7 g trong 5 ml)               5 ml 

Lithium carbonat bão hòa                                                                                  5 ml 

Acid acetic glacial                                                                                              1 ml