Định lượng insulin bằng kỹ thuật miễn dịch phóng xạ

1. NGUYÊN LÝ

Định lượng Insulin bằng kỹ thuật IRMA là kỹ thuật xét nghiệm miễn dịch phóng xạ không cạnh tranh bánh kẹp (sandwich IRMA) với nguyên lý sau: ủ kháng nguyên có trong mẫu thử với kháng thể đơn dòng kháng insulin bắt giữ đã gắn trên thành ống (bước 1), rửa loại bỏ các thành phần tự do không tham gia vào phản ứng kháng nguyên – kháng thể đơn dòng đặc hiệu; sau đó cho thêm kháng thể kháng insulin đơn dòng thứ hai có đánh dấu 125I, ủ tiếp, rửa lần hai để loại bỏ các kháng thể đánh dấu 125I tự do; Cuối cùng đếm hoạt độ phóng xạ trong ống nghiệm với thời gian 1 phút. Nồng độ kháng nguyên có trong mẫu thử tỉ lệ thuận với hoạt độ phóng xạ (cpm).

2. CHUẨN BỊ

2.1. Người thực hiện

- Bác sỹ chuyên ngành Y học hạt nhân
- Kỹ thuật viên xét nghiệm RIA
- Kỹ sư , kỹ thuật viên vận hành thiết bị đo mẫu
- Cán bộ hóa dược phóng xạ

2.2. Phương tiện, hóa chất

2.2.1. Phương tiện

Máy trộn (vortex type mixer), Máy lắc ngang (shaker) 200 - 350 rpm, thường dùng là 300 rpm, Máy đếm Gamma, Micropipette: 50l, 100l, Multipette: 200l, 300 l, 2000 l sai số ( ± 1%), Giá gắn ống nghiệm (tubes), Giấy thấm.

2.2.2. Hóa chất

Bộ kit định lượng Insulin gồm:
- Kháng thể kháng Insulin đánh dấu 125I: lọ 30ml, màu đỏ, hoạt độ phóng xạ: 460 KBq, trực dụng.
- Mẫu chuẩn insulin: 06 lọ có thể tích 1mL, màu xanh với nồng độ từ 1 - 5 - 20 - 100 - 250 - 500 IU/mL và 01 lọ 2 mL chuẩn có nồng độ 0.
- 01 lọ dung dịch tủa màu cam có thể tích 20 mL, trực dụng.
- 01 lọ huyết thanh insulin giám sát có dải nồng độ xác định, có thể tích: 1 mL, trực dụng.
- 01 lọ 25 mL dung dịch đệm dùng để rửa; trước khi sử dụng pha với 975mL nước cất hai lần.
- 100 ống nghiệm có gắn kháng thể kháng insuline đơn dòng trong thành ống, trực dụng.

3. CHỈ ĐỊNH

- Người bệnh có bệnh lý tiểu đường.
- U tụy